对硫磷、吡虫啉双标记时间分辨荧光免疫分析方法研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

农药在农业、林业、畜牧业等方面应用广泛，它是快速、高效、经济防治有害生物最重要的武器，但随着现代农业的发展，农药化肥被大量施用，同时带来如环境污染、生态遭破坏、农产品有毒物质超标等问题。而农药残留种类繁多，化合物极为复杂，针对单一类型的农药残留的分析方法很难适应新的分析要求，寻找适合于农药多残留的检测方法变得越来越重要。

对硫磷(parathion)属于有机磷类高毒农药，可通过食道、呼吸道和皮肤抑制胆碱酯酶活性，对动物的危害性大。世界各国对植物产品中对硫磷的使用和残留限量都作了严格限制^[1]。目前国内外广泛使用的对硫磷残留量的测定方法是色谱法，近年来，刘长武等运用酶联免疫技术分析水果中对硫磷的残留量并对免疫分析方法的优势给予肯定^[2]，周洪斌等^[3]就对硫磷残留酶联免疫检测试剂盒在进出口植物产品中的使用进行了研制，认为其具有操作简便、快速、灵敏等特点。

吡虫啉（imidacloprid）是一种具有内吸、触杀及胃毒作用的氯化烟碱类杀虫剂，可与乙酰胆碱受体结合，破坏昆虫中枢神经的正常传导而使昆虫兴奋致死^[4]，对哺乳动物低毒，但其大量使用不仅会对环境造成严重影响，同时因禽畜长期食用含吡虫啉残留的植物后，通过食物链流入人体内富集而危害人体健康。目前，国内外已制定出多种农产品中吡虫啉的最大残留限量标准（mrls），但国内在mrls制定方面还落后于国外^[5]。吡虫啉的检测方法主要是运用色谱技术和免疫检测技术，国内外关于吡虫啉仅有运用酶联免疫技术检测残留量的相关报道，朱国念等^[6]于2006年较系统地研究了吡虫啉的免疫学特性，为后续的相关研究奠定了基础。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：

利用实验室现有对硫磷和吡虫啉的半抗原以及多克隆抗体，建立对硫磷和吡虫啉的双标记时间分辨荧光免疫分析方法。

研究内容：

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案：

1. 标记抗体并纯化

采用合成链接的方法将dtta-eu和dtta-sm分别标记在对硫磷和吡虫啉抗体上，并通过琼脂糖凝胶色谱柱纯化抗体，利用紫外分光光度计检测纯化后的抗体，收集吸收波长最大的抗体，于-20℃保存待用。

4. 研究创新点

本课题以对硫磷和吡虫啉为研究对象，采用多标记时间分辨荧光免疫技术建立多残留检测体系，是一种新的农药多残留检测技术，它将解决目前多残留免疫分析研究中不能同时定性定量检测多种农药的难点问题，为化学农药的多残留免疫分析开创新的研究思路，为小分子化合物同时定性定量检测提供快速、灵敏、可靠的技术手段。

5. 研究计划与进展

2013年8月--9月 利用合成链接方法将dtta-eu以及dtta-sm分别标记到对硫磷和吡虫啉抗体上，再通过琼脂糖凝胶色谱柱纯化抗体。。

2013年9月--10月 从包被原浓度、抗体浓度和缓冲液配比三个方面优化反应条件，确定最优反应条件。

2013年11月--12月 进行对硫磷和吡虫啉双标记在田水、土壤、糙米、西红柿、甘蓝中的添加回收试验，用trfia方法检测并计算添加回收率。