水稻品种Swarnalata强休眠性相关基因的定位开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）

一、国内外研究背景

1. 休眠性介绍

2. 研究的基本内容和问题

1研究的目标、内容和拟解决的关键问题

1.1研究目标

l 挖掘swarnalata中控制休眠的基因,为阐明swarnalata强休眠的遗传基础提供依据。

3. 研究的方法与方案

2研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析

2.1研究方法

2.1.1对2013年收获的正季种植的F2群体材料的种子进行表型鉴定；

2.1.2采集F2群体材料叶片样本,提取样本DNA,利用indel和SSR标记筛选多态；

2.1.3选择多态性良好的标记上群体,进行样本基因型的鉴定；

2.1.4将91个F2个体的表型与基因型结合进行QTL分析,对Swarnalata中休眠性相关的基因进行初步定位。

2.2技术路线

2.3实验方案

2.3.1 用SDS法提取DNA

1、将F2群体的叶片剪碎于2ml小管中,加入钢珠并用液氮冷冻后打碎 ；

2、在小管中分别加入SDS 500μL 65℃水浴30min；

3、加入KAC 150ul冰浴30min；

4、加入与SDS等体积的氯仿：异戊醇（24:1）溶液,振荡器上充分摇匀,120rpm,30min；

5、离心,12000rpm,5min,转移400ul上清液于另一离心管中；

6、向上清液中加入2倍体积（800ul）-20℃冰箱30min；

7、离心,12000rpm,5min；

8、倒去无水乙醇,风干,加200ul ddH2O溶解,此为DNA母液；

9、将母液稀释10倍即为DNA工作液。

2.3.2 PCR反应

（1）PCR反应体系（10l）

（2）PCR反应程序

95℃变性5min；95℃变性30s、55℃退火30s、72℃延伸1min,共进行35次循环；72℃延伸7min,10℃保存。PCR反应在MJ Research PTC-225热循环仪中进行。

2.3.3聚丙烯酰胺凝胶电泳

100ml 8%的非变性凝胶工作液：

H₂O 70ml

10TBE 10ml

40% Acri/bis-Acri贮液 20ml

TEMED 100l

10%AP 1000l

（1）以50bp的DNALadder为对照比较扩增产物的分子量大小，电泳缓冲液为0.5TBE，150V恒压电泳。

（2）银染

① 用含酒精10%，冰乙酸0.5%的固定液固定2次，6min/次；

② 0.2%的硝酸银溶液渗透10～12min；

③ 蒸馏水清洗2次；

④ 0.002%硫代硫酸钠溶液置代30s；

⑤ 用含1.5%的氢氧化钠，0.4%的甲醛显色液显色；

待条带清晰后终止显色反应，记录实验结果。

2.4可行性分析

（1）水稻休眠性问题一直是作物遗传育种学研究的热点和难点，前人很多关于水稻休眠性的基础研究为本研究提供了非常好的思路与方法。

（2）本课题指导教师所在实验室是作物遗传与种质创新国家重点实验室和江苏省植物基因工程技术研究中心，为本课题的顺利实施提供坚实的条件。

（3）本研究基因组学和QTL分析均采用先进的分析方法，指导教师课题组实验室拥有齐全的设施和先进的设备，具有熟练的操作技术和分析能力，能顺利开展本课题所有研究内容。

（4）本课题指导教师长期从事水稻休眠性基因的研究,并具有多学科交叉的背景,为本课题的顺利进行提供强有力的指导。

（5）Swarnalata/02428 F2群体已经构建完成，表型数据也已初步鉴定完毕，为实验的顺利开展奠定了较好的基础。

4. 研究创新点

种子休眠是非常复杂的数量性状，研究进展非常缓慢。水稻品种Swarnalata是一个有名的抗性材料，但因为具有强休眠性，在应用中有许多不便之处。对Swarnalata中控制休眠的基因进行初步定位，为阐明Swarnalata强休眠的遗传基础提供依据，同时为培育适度休眠性的水稻品种分子标记辅助选择育种提供了理论基础。

5. 研究计划与进展

2013.07-2013.10：

swarnalata/02428 f2群体单株叶片采集,收获单株种子,同时做发芽试验,进行表型鉴定。查阅相关文献为实验做准备。

2013.11-2014.05：