吡虫啉、甲基毒死蜱、水胺硫磷残留三通道半定量免疫层析开题报告

随着化学农药防治成为植物病虫草害的重要防治手段，农药残留问题也日益突出。化学农药一般很难降解，易残留于自然环境与农产品中，对环境安全、人类健康造成威胁。由于人们对环境与食品安全认识的逐渐提高，使得农药残留检测分析技术受到越来越多的重视。因此建立快速、灵敏、准确、简便的农药残留检测方法对保护生态环境、保障人类的健康有着重要的意义。本课题旨在对免疫层析快速检测试纸条的研制，通过胶体金免疫层析法，对吡虫啉、甲基毒死蜱、水胺硫磷三种农药残留进行快速的区分及半定量检测。

免疫分析方法（Immunoassay, IA）是以抗原与抗体的特异性识别和可逆性结合反应为基础，把抗体作为生物化学检测器对化合物、酶或蛋白质等物质进行定性和定量分析的一门技术。免疫层析分析试纸条（Immunochromatographic assay test strips）是在免疫层析（Immunochromatography）技术的基础上发展出来的一种快速、简便的免疫分析方法，也简称为免疫试纸条。免疫试纸条的核心技术包括标记物的制备和标记以及免疫试纸条的组装与调试。免疫试纸条方法的优点是操作简单、快捷、检测成本低；而且检测结果直观；在半定量检测中可以不需要其他任何辅助仪器；适用于在线检测；易于推广等。

世界粮农组织（FAO）已向许多国家推荐此项技术；美国化学学会（AOAC）也将免疫分析方法与GC、HPLC方法一起列为农药残留分析的三大支柱技术，是21世纪最具挑战性和竞争性的超微量检测技术（杨依军等，2001）。美国环境保护署（EPA）、农业部食品安全检验司FSISUSDA和AOAC还分别制定了有关农药残留检测ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）试剂盒的评定和许可准则。

由于免疫试纸条检测方法在检测时间、检测方式、检测成本、结果显示等方面具有独特的优势，所以我们有理由相信，随着免疫试纸条技术的研究开发步伐的加快，将会运用在更多分析物上，同时也会有更多的产品出现，并得到消费者的认同。

参考文献：

1. Guo Y R, Liu S Y, Gui W J, et al. Gold immunochromatographic assay for simultaneous detection of carbofuranand triazophos in water samples[J]. Anal. Biochem. 2009, 389: 3239.

2. 陈军，余文静. 生态纺织品的农药残留与控制[J]. 环境保护, 2002 (9): 2830.

3. 高晓辉. 蔬菜上农药残留快速检测势在必行[J]. 农药科学与管理, 2000, 21: 1620.

4. 黄琼辉. 国内外农药残留检测技术研究进展和发展方向[J]. 福建农业学报, 2008, 23(2): 218222.

5. 王升吉, 杨崇良, 尚佑芬, 等. 免疫分析法在农药残留检测中的应用及前景[J]. 山东农业科学, 2005, 4: 7275．

1、研究目标：研制吡虫啉、甲基毒死蜱、水胺硫磷胶体金快速检测试纸条，对三种农药进行半定量检测。

2、研究内容：运用胶体金标记单克隆抗体，制备吡虫啉、甲基毒死蜱、水胺硫磷胶体金快速检测试纸条，并建立免疫层析分析方法，并进行白菜和大米的添加回收试验对准确性进行评价。

3、拟解决的关键问题：胶体金的制备；金标记单克隆抗体的制备；免疫层析试纸条的制备。

1、研究方法、技术路线、实验方案:

本实验采用胶体金免疫层析法。实验步骤如下：

1）抗体和人工抗原的制备

2）胶体金的制备

3）金标记单克隆抗体的制备

4）免疫层析试纸条的制备

5）免疫层析

6）添加回收试验

2、可行性分析：

本项目所研制的试纸可以检测同时含有吡虫啉、甲基毒死蜱、水胺硫磷三种农药的混合样品，操作简单、快捷、检测成本低；而且检测结果直观；在半定量检测中可以不需要其他任何辅助仪器；适用于在线检测；易于推广。可达到更方便、更高效区分三种农药以及半定量检测的目的。

8月1日9月30日：胶体金的制备，金标记单克隆抗体的制备，免疫层析试纸条的制备

10月1日11月1日：免疫层析，添加回收试验