禾谷镰孢菌对氰烯菌酯抗药性相关基因的克隆开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义

小麦赤霉病是国内外小麦生产上的重要病害之一（hou et al, 2011; zhang et al, 2009），不仅造成小麦产量的严重损失，而且病菌产生的赤霉毒素（主要为don）对人畜有毒害作用，威胁粮食安全和食品安全（champeil et al, 2004; bottalico perrone, 2002）。在我国，小麦赤霉病的病原菌主要为禾谷镰孢菌（fusarium graminearum schwein）〔有性态为玉蜀黍赤霉gibberella zeae (schewein) retch〕。化学防治是控制该病害的主要措施，自20世纪70年代我国一直单一使用多菌灵（carbendazim）防治小麦赤霉病，虽然早期取得了良好的防效，但是目前田间已经普遍存在抗药性问题（hou et al, 2011; chen et al, 2009; luo et al, 2009），氰烯菌酯的出现对于治理田间多菌灵抗药性群体具有重要意义。氰烯菌酯是我国创制的第一个氰基丙烯酸酯类杀菌剂，2007年进入商品化。前期研究表明，该杀菌剂结构新颖、作用方式独特、专化性强，主要对镰孢菌表现极强的抑制作用；但是在离体条件下，通过药剂驯化，禾谷镰孢菌对氰烯菌酯易产生抗药性。在田间出现抗药性之前研究禾谷镰孢菌对氰烯菌酯的抗药性机制，对科学制定该杀菌剂的应用策略和检测技术具有重要意义。

国内外研究概况

2. 研究的基本内容和问题

研究目标

克隆一个或多个禾谷镰孢菌对氰烯菌酯的抗药性相关基因，揭示禾谷镰孢菌对氰烯菌酯的抗药性机制。

研究内容

本项目拟以氰烯菌酯高等抗药性菌株y2021a的随机插入突变体文库为基础，筛选敏感或抗性显著下降的突变体；通过tail-pcr定位抗药性相关基因；利用同源双交换，构建抗药性相关基因的敲除/回复突变体，测定突变体对药剂的敏感性，解析禾谷镰孢菌对氰烯菌酯的抗药性机制，并对抗药性相关基因进行功能分析。主要研究内容包括以下3个方面：

3. 研究的方法与方案

研究方法

tail-pcr、double-joint pcr等

技术路线

4. 研究创新点

在基因水平上揭示禾谷镰孢菌对氰烯菌酯的抗药性机制。

5. 研究计划与进展

（1）2013.62013.7 筛选敏感突变体；

（2）2013.82013.9 tail-pcr定位抗药性相关基因；

（3）2013.92013.10 构建抗药性相关基因敲除/回复载体；