双酚A对鸡原始卵泡形成的作用开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

鸡肉、鸡蛋等产品在中国乃至世界都是必不可少的，随着人们生活水平的提高，鸡肉及其附属产品的需求量越来越大，因此这一市场也愈加广阔。近来，人们对鸡的繁殖和生产性能展开了广泛的研究。鸡的繁殖性能特别是产蛋率的高低主要取决于卵巢和卵泡的发育状况，原始卵泡的形成和发育是影响母鸡产蛋量的重要因素之一，具有极其重要的研究意义。

原始卵泡库在胚胎中是不可再生的资源，建立完成后便不再更新。其中大部分卵泡都将保持静止状态，只有少量的原始卵泡会被激活发育成为成熟卵泡。［1,2］。鸡胚的卵巢发育具有明显的阶段性，pgc迁移到生殖嵴后，卵巢才可以发生分化，而在pgc迁移到生殖嵴的过程中，伴随着大量的细胞增殖，12.5天时，增殖停止，生殖细胞开始进入减数分裂阶段［3］。在孵化的第3天开始，pgc开始固定在生殖原基处，而pgc只有迁移至生殖嵴，才能发育成为成熟的卵细胞［4］，最终发育成为卵子。鸡左侧的卵巢快速发育，而右侧的卵巢逐渐退化至不再发育，即为雌鸡的性腺发育方向。在这个过程中，有众多的神经性内分泌因子参与调控原始卵泡的形成［5］。

环境雌激素（environmental estrogens，ees）在自然界普遍存在, 可通过多种途径进入动物机体, 具有脂溶性和难降解的特性，其在机体内能够长期蓄积并通过食物链富集［6,7］。双酚a(bisphenol a,双酚a)是环境雌激素的一种，化学名称为2,2-二（4-羟基苯基）丙烷，是生产环氧树脂等一些塑料制品的重要中间产物，而这些材料都被广泛使用，成为我们生活中不可或缺的部分。环氧树脂有防水性，因此常被用作相关容器的内涂层。随着现代工业的迅速发展，塑料制品的用量与日俱增，与此同时，双酚a的摄入量也不容小觑。双酚a 主要用于聚碳酸酯的合成，2013年，据不完全统计，全世界约需508万吨双酚a来合成聚碳酸酯［8］。在2016年，有研究证明，塑料制品被反复使用或暴露在高温、高酸、高碱等环境中，双酚a会从这些容器中分离出来，对环境造成严重污染［9,10］。目前，越来越多的研究证实，双酚a不仅能够出现在土壤、水和用具等中，还可出现在空气中。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：

孵化二组鸡胚并分别采集鸡胚卵巢组织，通过拍照观察卵巢形态，制作卵巢组织切片，进行基因检测，进一步探究双酚a对鸡原始卵泡形成的影响。

研究内容：

3. 研究的方法与方案

研究方法：

试验设计：对二组鸡胚分别注射0.1ml/胚/次的0.05ug/ml的双酚a 作为处理组，和0.1ml/胚/次的pbs溶液作为对照组。隔天进行注射，共注射四次。分别在孵化的第15.5天、第18.5天和第20.5天三个时期采集鸡胚的卵巢组织，制作切片，提取dna和rna。分别形成一组二个注射液差异的对照和一组三个时间变量的对照，最后进行观察检测和分析，得出结果。

试验方法与样品采集：

1实验前计算所需鸡胚数目，购置合适大小的鸡蛋于实验室后，及时安放在孵化箱中。在一个常规孵化箱内对二组鸡胚进行孵化，控制合适的湿度和温度，使二组鸡胚所处的实验环境适宜并完全相同。

4. 研究创新点

鸡肉、鸡蛋等产品在中国乃至世界都是必不可少的，这一市场当下愈加广阔。近来，人们对鸡的繁殖和生产性能展开了广泛的研究。鸡的繁殖性能主要取决于卵巢和卵泡的发育状况，原始卵泡的形成和发育，是影响母鸡产蛋量的重要因素之一，具有重要的研究意义。双酚A属于环境雌激素类似物的范畴，能影响动物的生殖行为，而目前有关双酚A对鸡繁殖性能影响的研究极少。本实验将初步探究双酚A对鸡原始卵泡形成的影响，为进一步的科学研究和禽蛋生产提供有用的理论依据。

5. 研究计划与进展

2018.9-2015.10 查阅文献资料、熟悉实验操作

2018.10-2018.11 实验设计、实验材料的准备

2019.2-2019.4实验操作、各项实验指标：蛋重、胚重、胚蛋比变化情况；卵巢不同时期的外观形态变化情况；卵巢组织切片中皮质髓质的形态；dna甲基化变化情况；卵泡发育和排出相关基因（anxa2、irna、stra8、dnmt1、dazl、dmc1等）的表达情况）的测定