玉竹多糖提取、分离纯化及对鸡免疫细胞增殖能力的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

近年来，动物的病毒性传染病，如高致病性禽流感、新城疫、传染性法氏囊病等，严重危害畜牧业的发展，造成重大的经济损失。

动物疾病的防控离不开疫苗。

然而，单独使用疫苗效果普遍较差，需要配合相应的免疫佐剂才能达到满意的免疫效果。

2. 研究的基本内容和问题

1 研究目标：1.1 获得玉竹去蛋白分级多糖；1.2 研究玉竹去蛋白多糖的体外免疫调节作用。

2 研究内容：2.1 玉竹分级多糖的提取、纯化：采用水提醇沉法提取玉竹粗多糖；三氯乙酸法去除蛋白质、透析法去除小分子物质；硫酸苯酚法、考马斯亮蓝g-250分别测定多糖浓度和蛋白质浓度；分级醇沉获得去蛋白分级多糖（以下称为玉竹分级多糖）。

2.2 玉竹分级多糖的免疫调节活性：采用mtt法测定玉竹分级多糖对鸡t淋巴细胞、b淋巴细胞和前体树突状细胞的增殖影响；采用elisa法测定玉竹分级多糖对鸡t淋巴细胞、b淋巴细胞和前体树突状细胞的释放il-2、il-6等细胞因子的影响；采用倒置显微镜观察多糖对树突状细胞成熟的影响。

3. 研究的方法与方案

1 研究方法1.1采用常规提取、三氯乙酸去蛋白和分级醇沉方法得玉竹多糖去蛋白分级多糖。

1.2 测定不同醇沉等级下玉竹多糖对鸡外周血t淋巴细胞、脾脏b淋巴细胞和树突细胞增殖能力的影响。

2 技术路线 见附件3 实验方案3.1 玉竹粗多糖的提取 玉竹粉碎，取粉末200g，热水煎煮提取2次，过滤取上清液，浓缩至200ml，加入无水乙醇至含醇量为80，静置过夜后，抽滤，干燥，得玉竹粗多糖。

4. 研究创新点

特色或创新之处 通过重复的体外试验，对活性化合物进行药理筛选，能够为明确其药理作用提供依据。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2017.10-2017.111)完成玉竹多糖的提取和分级醇沉2)完成玉竹多糖浓度测定和蛋白浓度测定2017.11-2017.121)完成去蛋白、透析、冷冻干燥等一系列工作2)测定去蛋白后多糖浓度测定和蛋白浓度 3)2018.03-2017.051)完成细胞试验2)整理数据，准备结题预期研究成果1)完成玉竹多糖的提取、分离纯化等试验2)通过体外试验，对活性化合物进行药理筛选，能够为明确其药理作用提供依据。