稻米中稻曲菌素A的检测技术及污染情况分析开题报告

1. 研究目的与意义

研究背景：
稻曲菌素是由稻曲病原菌侵染作物后产生的一类环肽毒素，常在水稻上发生。

由稻绿核菌(有性型为villosiclava virens tanaka and tanaka,无性型为ustilaginoidea virens takahashi)侵染水稻穗部形成稻曲球。

近年来对于稻曲病菌的研究，已经明确的次生产代谢的产物有两类，第一类为从稻曲球的醚提取物中鉴定出的生物活性物质，命名为黑穗病素（ustilaginoidins）,属于萘并吡喃酮类，为有色脂溶性物质。

2. 研究内容和预期目标

研究内容：
（一）建立稻曲菌素提取检测方法
（二）稻曲菌素提取与检测方法学验证
（三）针对其污染情况进行分析
预期目标：分析实验数据，针对不同省市污染情况进行分析，得出结论，完成论文。

3. 研究的方法与步骤

采用高效液相色谱-质谱联用技术(lc-ms〉的方法对稻曲菌素进行检测，以液相色谱作为分离系统，质谱作为检测系统。

（1）提取：将提前准备好的样品粉末分别称取1g置于50ml离心管中，分别加入10ml超纯水，涡旋1min，超声10min，取出后于5000r/min离心5min，取上清提取液于15ml离心管内，做好标记，作为固相萃取净化样液。
（2）净化：准备好固相萃取装置，在hlb柱子内加入2ml甲醇，柱内无残留液体时加入2ml0.5%甲酸5mmol/l乙酸铵，以平衡柱子。加入1ml上清液样品，随后加2ml0.5%甲酸5mmol/l乙酸铵淋洗。淋洗结束后换新的15ml离心管，用于接用2ml25%甲醇洗脱的洗脱液，使用抽滤装置抽滤20min并收集离心管进行氮吹，吹干后于离心管内加入1ml5%乙腈5mmol/l乙酸铵复溶，涡旋10min，过0.22μm滤膜，滤液用高效液相色谱-串联质谱分析。
（3）方法学验证:针对基质效应、线性、检出率、精密度及回收率进行实验，验证方法可行性。

4. 参考文献

1.胡元森, 杨浩杰, 谢澳文, 等. 稻曲菌素及其生物合成途径研究进展[J/OL]. 河南工业大学学报(自然科学版), 2020.

2.林晓燕, 马有宁, 曹赵云, 等. 水稻稻曲病污染、毒素分析与防控技术研究[J]. 农产品质量与安全, 2020.

3.李月娇，孙淑琴，李广胜，稻曲菌黑粉菌素生物活性机器合成途径研究进展，天津农业科学，2022.

4.尹小乐，陈志宜，刘永峰等，稻曲菌素A的相对含量分析及其与致病力的相关性，中国农业科学，2012.

5.陈晓洋，稻曲菌三个致病基因的功能研究及水稻抗病材料创制，华中农业大学，2023.

6.裴张新，稻曲菌酯环化酶UvEC1及CCHC型锌指蛋白的功能研究，，华中农业大学，2022.

7.姜慎, 唐春生, 谭志琼. 国内外稻曲病研究现状[J]. 热带农业科学, 2010.

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10.顾志敏, 丁正中, 陈析丰, 等. 实时荧光定量PCR筛选稻曲病菌内参基因[J]. 中国水稻科学, 2012.

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12.祭芳, 曹欢, 徐剑宏, 等. 高效液相色谱-串联质谱法定量检测稻谷中的稻曲病菌毒素A和D[J]. 中国水稻科学, 2012.

13.卞英芳, 于莎莎, 牟仁祥, 等. 高效液相色谱-高分辨质谱法鉴定水稻稻曲病菌毒素[J]. 色谱, 2015.

14.吕仕琼, 刘浩, 赵江林, 等. 稻曲菌素研究进展[J]. 中国农学通报, 2010.

5. 计划与进度安排

（1）2024-2024-1学期17-20周～2024-2024-2学期第1周～第2周，查阅资料，准备开题报告，外文论文翻译；

（2）第3周～第6周（2024-3-13～3-31）：稻曲菌素的检测方法；

（3）第7周～第11周（2024-4-2～5-3）： 稻曲菌对水稻产量的影响，以及稻曲菌感染水稻后产生的毒素种类研究等；