H9N2亚型禽流感病毒NJ06株的全基因序列分析及其对小鼠的致病性开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

禽流感（avianinfluenza，ai）是由正粘病毒科（orthomyxoviridae），a型流感病毒属，a型流感病毒中任一亚型引起的各种家禽及野生禽类感染和/或疾病综合征[1]。其病原通常称为禽流感病毒（avianinfluenzavirus，aiv），病毒基因组由8个分节段单股负链rna组成，编码至少10种病毒蛋白。意大利的perroncito于1878年首次详细的报道了禽类暴发类似禽流感的疾病，当时称为鸡瘟，于1955年最终证实该鸡瘟是由a型流感病毒引发的[1,2]。根据a型流感病毒表面糖蛋白血凝素蛋白（hemagglutinin，ha）和神经氨基酸酶（neuraminidase，na）的抗原性不同，可分为不同的亚型，目前已发现有16种ha亚型和9种na亚型[1-3]。禽流感病毒除依据抗原性分类外，还根据其致病性强弱，又有高致病力和低致病力禽流感之分[4]。迄今为止，所有高致病性禽流感均由h5和h7亚型毒株所引发的[2]；而家禽中暴发的低致病力禽流感有h5、h7和h9亚型，其中危害最为严重的为h9n2aiv。

h9n2aiv于1966年由homme等首次从北美暴发禽流感的火鸡群中分离到[5]，一直到20世纪90年代，该病毒仅限于部分地区局部流行，危害不大。但自20世纪90年代以后，h9n2aiv在亚洲地区广泛流行，并逐步扩散到世界各地，目前该病毒已在欧州、亚州和非洲的多个国家和地区的家禽中发展为地方流行，给当地的养禽业造成了严重的经济损失[6]。我国自1994年首次从鸡群中分离到h9n2aiv以来，该病毒一直在我国的家禽中流行和传播，目前已发展为地方流行，给我国的养禽业造成了极大的经济损失[6-8]。此外，h9n2aiv除了感染家禽外，还可以感染猪和人，并且为感染人的h5n1和h7n9aiv提供了6个内部基因片段[7,8]，因而h9n2aiv所诱发的公共卫生问题也越来越受到人们的关注。

疫苗接种是当前我国针对h9n2aiv所采取的最普遍的防控手段，而在疫苗的免疫选择压力下h9n2aiv也在不断的发生重组和变异，这不仅给家禽中疫病的防控造成了困难，也给人类的健康造成了威胁。因此，对h9n2aiv的流行情况进行实时监测，并搞清其遗传进化特点，不仅有利于家禽业的健康发展，而且还具有非常重要的公共卫生学意义。本文拟对一株从发病鸡中分离到的h9n2aiv进行全基因测序，并对其进行遗传进化分析，这将为h9n2aiv的流行病学研究提供重要的试验数据。同时，我们还将通过小鼠模型来评价h9n2aiv对哺乳动物的潜在致病性，这将有助于h9n2aiv的跨物种传播和致病机制的研究。

2. 研究的基本内容和问题

目的及内容：

本研究主要是对h9n2亚型禽流感病毒nj06株的全基因序列分析及其对小鼠的致病性。主要内容有全基因测序、抗原性分析、对小鼠的致病性测定。

拟解决的关键问题：

3. 研究的方法与方案

实验方案与研究方法：

1通过全基因测序和构建遗传进化树来分析病毒nj06与已公布的h9n2aiv代表性毒株的亲缘关系。

2通过ha的关键氨基酸位点的比对来对nj06的抗原性进行分析。

4. 研究创新点

特色或创新之处：

通过全基因测序和遗传进化树的构建揭示H9N2AIVNJ06株与GenBank中已公布的H9N2AIV的亲缘关系，为揭示H9N2AIV的遗传进化规律提供重要的实验依据。

5. 研究计划与进展

2015年3月2015年4月：

h9n2aiv的全基因扩增和测序。

2015年4月5月：