猪肺炎支原体的表面蛋白烯醇化酶的表达及酶活性分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

猪支原体肺炎（mycoplasmal pneumonia of swine，mps），又称猪地方性流行性肺炎（swine enzootic pneumonia，sep），是由猪肺炎支原体（mycoplasma hyopneumoniae，mhp）引起的一种慢性接触性传染病，是猪呼吸道病综合征(porcine respiratory disease complex，prdc)的主要原发性病原之一，发病率高，虽死亡率不高，但由于mhp能破坏呼吸道黏膜纤毛屏障，从而继发其他致病菌的感染。

1965年，在美国（mare和switzer）和英国几乎同时从病猪中分离出猪肺炎支原体。

从那时起，猪肺炎支原体在诱导猪慢性肺炎中的作用一直是养猪业尚未解决的问题，给养猪业造成了巨大的损失[1]。

2. 研究的基本内容和问题

一、研究的目标通过原核表达获得mhp的烯醇化酶，研究该酶的活性。

二、研究的内容1、mhp的烯醇化酶基因表达载体的构建。

2、mhp的烯醇化酶基因蛋白的原核表达。

3. 研究的方法与方案

一、研究方法1 用原核表达载体克隆mhp的烯醇化酶表达基因，在大肠杆菌中表达。

2 用柱层析方法纯化表达蛋白。

3 用酶学方法研究表达蛋白酶活性。

4. 研究创新点

猪肺炎支原体(mhp)是引起猪支原体肺炎(mps)的病原，该病给养猪业造成巨大的经济损失。

由于缺乏对具有良好免疫原性的mhp特异性蛋白的深入研究，使得mhp在致病机制、血清学检测方法和新型疫苗的研究发展上受到一定限制，从而影响了对mps的控制。

烯醇化酶在其他细菌或支原体上已报道过，但在mhp上还未见报道。

5. 研究计划与进展

一、获得目的基因，构建表达载体。

（34月份）用软件设计合成引物，通过pcr扩增目的基因，插入到表达载体pgex-4t-1中，构建重组表达质粒。

二、表达目的蛋白。