乳酸杆菌s-层蛋白拮抗PEDV感染对细胞凋亡的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

乳酸杆菌是人类和动物消化道、生殖道中一种正常的优势有益菌，具有维持动物消化道内微生物区系平衡、加强黏膜屏障、增强机体免疫力等重要的生物学功能[1-3]。

目前已经证实有多种乳酸杆菌具有s-层蛋白[4-6]。

乳酸杆菌s-层蛋白的结构等生化特性与一般细菌s-层蛋白有所不同，如等电点较高、分子量较小等。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：测量多大浓度的乳酸杆菌s-层蛋白对pedv感染的拮抗效果最好。

研究内容：细胞传代、铺24孔板和96孔板、测量最合适的病毒量、培养基的配制、s-层蛋白的提取、不同浓度的s-层蛋白和病毒一起接种细胞、tcid50的计算等。

拟解决的关键问题：细胞要铺的均匀、不能长得太密集、要设立阴阳性对照、防止污染、tcid50的计算。

3. 研究的方法与方案

研究方法：用病毒接种细胞的方法测出最合适的病毒量，进而用最合适的病毒量与s-层蛋白一起接种细胞，测出多大浓度的s-层蛋白对病毒感染的拮抗效果最好，即多少浓度以上细胞开始不出现病变。

技术路线:见附件。

实验方案:mrs培养基的配制:蛋白胨:30.0g;牛肉膏:30.0g;酵母提取物:15.0g；葡萄糖：15.0g；乙酸钠：15.0g；柠檬酸二铵：6.0g；土温80：3.0g；磷酸氢二钾：6.0g七水合硫酸镁：0.6g；一水合硫酸锰：0.15g；蒸馏水：3.0l。

4. 研究创新点

1.乳酸杆菌S-层蛋白能够显著拮抗PEDV感染对细胞凋亡的影响。

2.本研究首次从细胞凋亡方面深入研究S-层蛋白对PEDV感染的拮抗机制，为S-层蛋白的临床应用奠定理论基础。

5. 研究计划与进展

2015年9月1号- 2015年9月15日：锻炼传细胞的能力。

2015年9月16号-2015年9月30日：初步尝试提取s-层蛋白。

2015年10月1号-2015年10月31日：把s-层蛋白全部提取。