1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
c-myc 原癌基因(protooncogene)最初由鸡病毒v-m yc原癌基因和同源物中分离出来。
原癌基因家族包括3个相关基因 :c-myc ,n-myc , l-myc[1]。
c-my c 属核转录因子类原癌基因 ,其编码的蛋白质在核内结合于 dna 链上 ,对转录过程实施调控。
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2. 研究的基本内容和问题
1.研究目标1.1 初步了解c-myc基因在鸡卵泡和颗粒细胞中的表达1.2 进一步确定过表达c-myc基因对鸡卵泡发育的影响2.研究内容c-myc基因能影响细胞增殖。
对鸡各等级卵泡和颗粒细胞进行组织采样和rna提取,实时定量pcr检测各组织中c-myc基因的表达水平。
初步了解c-myc基因与卵泡发育的关系。
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3. 研究的方法与方案
1.研究方法及方案1.1总rna提取用trizol法提取高产鸡各等级(f1,f2,f3,f4,f5,f6,f7)卵泡及颗粒细胞的总rna,具体操作参照试剂盒说明书进行。
提取的总rna用depc处理水溶解,琼脂糖凝胶电泳检测rna的完整性, -80℃保存备用。
1.2鸡小黄卵泡颗粒细胞的分离培养采集240日龄高产母鸡小黄卵泡(d=6-8mm),机械法分离卵泡颗粒细胞。
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4. 研究创新点
1.分析了鸡c-Myc基因在组织表达差异。
2.利用转染分析了过表达c-Myc基因对鸡卵泡发育的影响。
5. 研究计划与进展
2015.9-2015.10:查阅相关的资料,设计实验;2015.10-2015.12:组织采样,总RNA提取,引物设计合成,合成载体;2016.02-2016.04:颗粒细胞的分离和培养,载体转染,PT-PCR完成。
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