中华绒螯蟹不同种群消化酶活性差异的初步探究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

中华绒螯蟹(eriocheir ，sinensis)归属于节肢动物门(arthropoda)、甲壳纲(crustacca)、十足目(decapoda)、方蟹科(grapsidae),绒螯蟹属(eriocheir)。中华绒螯蟹是一种经济蟹类，拥有许多别称，譬如河蟹、毛蟹、清水蟹、大闸蟹等，其营养丰富，肉质鲜美，在中国久负盛名，也是我国重要的经济甲壳动物和水产养殖对象。绒螯蟹因其螯足可用于取食和抗敌，掌部内外缘密生绒毛而得名。中华绒螯蟹体内含有较多的维生素a，对皮肤的角质化有帮助，对儿童的佝偻病，老年人的骨质疏松也能起到补充钙质的作用。中华绒螯蟹是一种杂食性动物，水生植物、螺、蚌、鱼、虾、蠕虫、蚯蚓、昆虫及其幼虫等均可作为大闸蟹食物。它在我国自然分布广泛,但主要分布于长江、辽河以及瓯江流域,分布于这些水域的河蟹分别被称之为长江蟹、辽河蟹和瓯江蟹,其中以长江水系产量最大，种质更优。但由于对蟹苗和成蟹无节制的捕捞，其产量逐年下降，资源受到严重破坏^[1-2]。

动物对营养物质的吸收利用程度取决于动物消化酶活力的高低^[3]，而消化酶活力的高低也代表其在不同发育阶段所需要的营养物质的差异^[4-5]。已有研究表明，虾蟹类消化酶的活性与其摄食的饵料密切相关^[6-9]。由于消化酶活性可作为虾蟹饵料各营养成分消化吸收和利用的重要指标，并且由于肝胰腺是甲壳动物主要的消化器官，是消化酶的主要来源^[10]，因此本实验通过测定并分析同一时间段三个种群的中华绒螯蟹肝胰脏内消化酶活性的差异，可以初步了解三个种群在相同时间段内的摄食种类及不同营养物质的消化情况。在国外，对甲壳动物消化酶活力的研究已有80年的历史，研究内容主要集中在成体消化酶的产生、生化特性及消化酶活力变化与性腺发育的关系等方面^[11]。而幼体 ( 尤其是蟹类 ) 这方面的研究很少，仅在少数几个种类有过报道。朱清顺、柏如发^[12]比较了池塘养殖的中华绒螯蟹与长江野生中华绒螯蟹生物学特性，但并未研究二者消化酶活性的区别；李新亮、赵燕^[13]将刘玉梅、潘鲁青的方法略加修改，对中华绒螯蟹幼体消化酶活力进行了研究，结果表明类胰蛋白酶的活性比胃蛋白酶的活性强，淀粉酶的活性强于纤维素酶；徐生俊、严雷、吴莼^[14]以酪蛋白酶为底物，对中华绒螯蟹胃、肠及肝、胰脏蛋白酶的最适ph等进行了探究，发现其消化道蛋白酶的最适ph值在5.4-5.8和7.2-7.6；潘鲁青，王克行^[4]对中华绒螯蟹幼体消化酶活力与氨基酸组成进行了研究，实验结果表明，在中华绒螯蟹幼体发育过程中五种消化酶活力表现出三种变化模式。胃蛋白酶、类胰蛋白酶和淀粉酶活力在食性转换过程中出现较明显变化,而纤维素酶和脂肪酶活力极微；施炜纲、谢骏、周恩华^[15]对中华绒螯蟹幼体及成蟹的四种主要消化酶活性进行了研究，结果表明在河蟹幼体发育过程中 ,除纤维素酶较少 ,难以比较外 ,胃蛋白酶、类胰蛋白酶和淀粉酶的活性动态变化趋势相同，成蟹养殖阶段 ,淀粉酶活力远远高于其他三种酶活力。但还没有人对三个种群河蟹的消化酶活性进行比较，因此本实验的开展对以后了解掌握中华绒螯蟹在不同生活环境下的适应性特征具有一定的参考价值。

参考文献：

2. 研究的基本内容和问题

本实验通过对中华绒螯蟹肝胰脏中淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶、纤维素酶等消化酶活性的测定，初步分析三者消化酶活性的差异，由此可以初步得出三个种群在相同时间段内的摄食种类及不同营养物质的消化情况。

目前还需要进一步解决中华绒螯蟹肝胰脏离心后上清液中仍含有部分脂肪的问题。

3. 研究的方法与方案

本实验需从长江、宜兴采集三个不同种群的中华绒螯蟹，分别为长江野生中华绒螯蟹，宜兴大浦人工繁殖中华绒螯蟹以及野生蟹苗由人工养殖的中华绒螯蟹。将三种种群的中华绒螯蟹分别标记解剖，并提取其肝胰脏的上清液，按一定比例进行稀释，利用试剂盒与分光光度计测出其吸光度，进行换算后得出几种不同消化酶的活性，利用excel得出不同种群中华绒螯蟹消化酶活性是否有明显差异。

本实验从实验材料的采集，几种消化酶活性的测定，后期实验结果的处理，均可实现，因此此实验具有极高的可行性。

4. 研究创新点

此实验的创新之处在于分析同一时间段三个种群的中华绒螯蟹消化酶活性的差异，由此可以初步得出三个种群在相同时间段内的摄食种类及不同营养物质的消化情况，因此本实验的开展对以后了解掌握中华绒螯蟹在不同生活环境下的适应性特征具有一定的参考价值。

5. 研究计划与进展

本实验从2015年四月起，每个月采集三个种群的中华绒螯蟹，并进行试验，实验将持续至2015年12月。

目前试验已全部完成。