鸡H9亚型禽流感病毒的分离与鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1、本课题意义：禽流感(avian influenza,ai)是由正黏病毒科（orthomyxoviridae），a型流感病毒中任一亚型引起的家禽、野鸟和部分哺乳动物发病的一种传染病[1-2]。

根据其致病力可分为高致病性禽流感（highly pathogenic avian influenza，hpai）、低致病性禽流感（low pathogenic avian influenza，lpai)和无致病性禽流感三种[3]。

根据其表面抗原血凝素（ha）和神经氨酸酶（na）的抗原性不同，分成17 种ha 和10 种na的亚型[4]。

2. 研究的基本内容和问题

1、目的及内容： 通过对禽流感H9N2亚型的可疑病料的病毒分离、RNA提取和PCR基因扩增及基因测序，SPF鸡胚回归感染试验、鸡胚接种试验并提取尿囊液进行测序对比等初步证明其中病料含有的病毒，为提供病料的养禽地提供预防及治疗的意见及建议，并对禽流感H9N2亚型病毒的临床症状诊断和防制提供重要依据。

2、拟解决的关键问题：通过实验室多种方法，确定发病鸡所感染的病毒，为禽流感H9N2病毒科学防控策略的制定提供试验依据。

3. 研究的方法与方案

1、研究方法及实验方案：a）病料样品的采集及保存：解剖病死鸡，采集病变组织，病料组织用生理盐水研磨制成匀浆，离心并收集上清液于20℃冻存。

b）病毒分离：反复冻融、离心取上清、提取总rna及dna、反转录及pcr扩增、琼脂凝胶电泳检测、切胶并回收、基因测序。

c）接种spf鸡胚：每份样品上清液经尿囊腔接种9~11日龄spf鸡胚数枚，接种后37℃孵育可收获部分尿囊液，并进行血凝（ha）试验；d）动物回归试验：攻毒spf鸡群，采拭子并采血解剖，记录并分析病理变化；e）再次接种鸡胚：拭子接种鸡胚，进行血凝（ha）试验，收取尿囊液提取rna，进行反转录及pcr扩增，琼脂凝胶电泳检测、切胶并回收、基因测序。

4. 研究创新点

通过来自江苏省某地的家禽可以病料，进行禽流感H9N2亚型病毒的分离及实验室多种试验方法进行初步分离，全面揭示禽流感H9N2亚型病毒家禽感染后的临床症状、血凝血凝抑制结果、基因测序情况。

5. 研究计划与进展

1、08月31日09月15日 实验室环境熟悉、资料查询准备2、09月16日10月07日 拟定试验方案、撰写开题报告3、10月08日11月09日 病毒分离，进行实验室分离鉴定试验4、11月10日12月10日 撰写中期报告及结果分析阶段 5、12月11日01月15日 实习总结及论文初稿撰写阶段6、2月29日 未定完成论文终稿及答辩工作