猪圆环病毒2型的分离与鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）1、本课题的意义猪圆环病毒（pcv）是目前被发现的最小的脊椎动物病毒，其基因组大小不超过1.8kb。

由于pcv基因组很小，为了充分的利用遗传物质，pcv大多数基因呈现套叠现象。

目前圆环病毒有三个基因型pcv1、 pcv2、 pcv3。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标、内容和拟解决的关键问题1、研究的内容样品的采集，病毒的分离与鉴定2、研究的目标本研究旨在对采样得到的猪肺和淋巴结样品进行提取核酸，用pcr鉴定出阳性样品，在pk-15细胞上传代培养，分离得到病毒，最后用间接免疫荧光进行鉴定。

2.1样品的采集从南京周边猪场至少收集到50个样本，用pcr方法进行鉴定，选出强阳性样品。

2.2病毒的分离与鉴定将强阳性样品的肺或淋巴结组织加入pbs，磨碎后离心提取上清，用滤器过滤后接入pk-15细胞，传代培养，不出现细胞病变。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析1、实验方案1.1实验材料猪病料样品来自南京周边猪场，细胞为江苏省农业科学院兽医研究所所提供。

1.2主要实验试剂dmem液，小牛血清，pbs液，核酸提取试剂盒，rtaqdna聚合酶、ex-taq连接酶、dntp、dl2000 dna marker、pcv2检测引物。

1.3主要器材及仪器高速台式离心机、pcr仪、细胞培养瓶、各量程移液枪、电泳仪、倒置显微镜、荧光显微镜、超净台等1.2实验方法1.2.1病料收集与鉴定解剖死猪后无菌收集肺脏和淋巴结，切适量大小组织装入破碎管中，加入小钢珠和pbs液，充分研磨后离心，吸取上清，用核酸提取试剂盒提取核酸。

4. 研究创新点

特色或创新之处除了使用常用的普通PCR和荧光定量PCR方法鉴定PCV2病毒外，运用了间接免疫荧光的方法，更加直观的看到的PCV2病毒在细胞中的感染。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展1、2017年9月10日2017年12月3日：实习单位实习。

熟悉实验室的规章制度，学习各种实验操作。

收集病料，鉴定病料，开始细胞接毒并传代培养。