嗜水气单胞菌的ST分型及生物学特性分析开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

嗜水气单胞菌（aeromonas hydrophila）是一种革兰氏阴性菌，广泛分布与水体环境，是引起鱼类败血症的主要病原，同时也是两栖类、爬行类、以及哺乳类动物的重要病原[1]。

该菌能够引起鱼类的运动性气单胞菌败血症（motile aeromonas hydrophila，mas），虽然被认为是一种条件性致病菌，但仍然能够引起mas在水产行业里的爆发性流行。

目前，研究者已从多种发病水生动物体内分离得到嗜水气单胞菌，saitanu 等［2］报道了鲤鱼红斑病，分离得到了致病菌嗜水气单胞菌； nawarat 等［3］报道了放养于湖岸的家畜发生了溃疡病，并分离出嗜水气单胞菌； jiravanichpaisal 等［4］从全身充血的蝲蛄体内分离得到高致病性的嗜水气单胞菌；刘荭等［5］从发病锦鲤体内分离得到了嗜水气单胞菌。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究目标对从患病鱼分离出的嗜水气单胞菌进行MLST分型及生物学特性的分析，以期望确定嗜水气单胞菌的ST分型，并对其致病性有更深入的了解，进而预防和控制该型菌株所引起的疾病。

2.研究内容(1)提取细菌基因组DNA(2)MLST测序:采用PCR产物直接测序法测定6个看家基因(3)序列分析并进行MLST分型(4)斑马鱼致病性试验(5)生物被膜形成能力的测定(6)运动能力的测定（7）溶血活性和胞外蛋白酶活性的检测3.拟解决的问题确定分离得到的菌株是否为ST251型菌株，并了解其主要生物学特性，以对流行株的致病机制进一步了解，为更有效的预防和控制MAS的暴发性流行奠定基础。

3. 研究的方法与方案

1.研究方法和方案(1)提取细菌基因组dna 取含1.8108菌的菌液加入1.5ml的离心管中7500rpm/min离心5min，弃上清。

之后加入0.6ml无菌去离子水，震荡混匀，100℃水浴5min后离心，上清作为dna模板-20℃保存。

(2)mlst测序 针对六个看家基因（gyrb,grol,glta,metg,ppsa,reca）设计特定引物来进行pcr扩增，纯化后测序。

4. 研究创新点

对于嗜水气单胞菌的ST分型及生物学特性鉴定可以对流行株的致病机制提供新的见解，为更有效的预防和控制MAS的暴发性流行奠定基础。

5. 研究计划与进展

015.10-2015.11 查阅文献，熟悉实验操作技术并进行MLST测序和分型。

2015.11-2015.12 进行斑马鱼致病性试验，生物被膜形成能力的测定和运动能力的测定2015.12-2016.1分析实验结果，必要时重复部分实验，撰写论文。